同: genetic recombination

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出典(authority):フリー百科事典『ウィキペディア（Wikipedia）』「2016/01/31 14:22:46」(JST)

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遺伝子工学（いでんしこうがく、英：genetic engineering）とは、遺伝子を人工的に操作する技術を指し、特に生物の自然な生育過程では起こらない人為的な型式で行うことを意味している。遺伝子導入や遺伝子組換え（いでんしくみかえ：組換えDNA（くみかえDNA））などの技術で生物に遺伝子操作（いでんしそうさ）を行う事を一般に指す。

概要

DNAを分離し、操作し、細胞もしくは生物に再導入して、そのDNAが増殖できるようにする過程からなる。有用なタンパク質を発現させることや、生物に新たな形質を導入することなどを目的とする。細胞融合やクローン技術などとともに、バイオテクノロジーと総称される。

なお、生物で自然に起こる過程としてのDNAの組換えについては、遺伝的組換えを参照のこと。

一部の例を挙げれば、細菌や培養細胞によるホルモン（インスリンやエリスロポエチンなど）の生産、除草剤耐性などの性質を与えた遺伝子組換え作物、遺伝子操作を施した研究用マウス（トランスジェニックマウス）、また人間を対象とした遺伝子治療の試みなどがある。このような遺伝子操作産物を目的とする応用のほかに、生物学・医学研究の一環（実験技術）としての遺伝子操作も盛んに行われている。

タンパク質はDNA上の特別な配列である遺伝子によって決定されるから、遺伝子DNAの操作によってタンパク質に変更を加えることができる。その一つの方法として、遺伝子を含むDNA断片を分離し、遺伝子を切り出して、他のDNAの部分に導入するものがある。

1970年代初頭までに、DNAを特定の位置で切断する制限酵素、DNA断片をつなぎ合わせるDNAリガーゼ、DNAを細胞に導入する形質転換の技術が開発され、これらが組換えDNA技術の基礎となった。さらに1980年代にはポリメラーゼ連鎖反応（PCR）によって目的とする遺伝子の複製が容易に行えるようになり、遺伝子工学はますます利用範囲を広げた。

2015年にはCRISPRを用いた世界初のヒト受精卵の遺伝子操作が中華人民共和国で行われ、国際的な波紋を起こした^[1]^[2]。

遺伝子工学の危険性と規制

1970年代の遺伝子工学の発展により、生物学・医学に対する無限の可能性が生まれたと多くの研究者が考えたのに対し、バイオハザードの現実的危険を訴える声も挙がり、倫理的問題も指摘された。ポール・バーグによる最初の本格的な遺伝子組換え実験を契機として、1975年のアシロマ会議で遺伝子組換え実験の規制に関する議論が行われ^[3]、その後の自主的規制の基礎的枠組みが構築された^[4]。

2003年には生物多様性保護の観点からカルタヘナ議定書が締結され、現在締約国はこれに基づく法的規制（日本ではカルタヘナ法）を行っている。

CRISPR/Cas9をはじめとした、ゲノム編集技術に対しては、ヒトの受精卵等の生殖細胞についての倫理的な懸念がもたれていたが、着床させる操作が国際的な学会の合意により自主規制されることになった^[5]。但し、定期的に規制を見直すべきとも述べられている^[6]。なお、日本国内に限れば、厚生労働省によるガイドラインで、生殖細胞と受精卵の遺伝子改変を着床の是非に関わらず全面的に禁止している^[7]。

応用

最初の遺伝子組換え医薬はヒトのインスリンで、アメリカで1982年に承認された^[8]。もう一つの初期の応用例にはヒト成長ホルモンがある^[9]が、これは以前には遺体から抽出されていたものである。1986年には最初のヒト用組換えワクチンであるB型肝炎ワクチンが承認された。これ以後、多くの遺伝子組換えによる医薬・ワクチンが導入されている。

このほかに遺伝子工学の応用としてよく知られるのは、すでに実用化されている遺伝子組換え作物などを含む遺伝子組換え生物（GMO）である。まだ実用化はされていないが有望視され研究されているものに、経口用ワクチンやアレルギー治療用ペプチドを、作物で安価に生産する試みがある。

ヒトを遺伝的に「改良」することは倫理上の重大問題だとする意見がある一方、体の一部の細胞に必要な遺伝子を導入して（生物種としてのヒトを変えることにはならない）不足・欠失している機能を補う遺伝子治療は有望視され、すでに治験段階に入ったものもある。

研究技術としての遺伝子工学

ゲノムプロジェクトの進展により、遺伝子科学は新しい段階に入った。存在が明らかになっても機能が不明な遺伝子が増え、これを調べる研究（逆遺伝学と呼ばれる）が生物学でますます重要性を増している。また生物学の関心は個別の遺伝子・タンパク質から、膨大なタンパク質の間の相互作用ネットワーク、およびそれと各種生命現象との関係に移りつつある。これらの研究にも遺伝子操作技術は不可欠である。

近年特に発展している実験技術の例を挙げると、次のようなものがある。

遺伝子破壊

詳細は「遺伝子破壊」を参照

遺伝子の機能を失わせる技術。これにより、特定の遺伝子の突然変異によって何が起こるかを明らかにでき、特に発生学への寄与が大きい。

これにはショウジョウバエ、植物や微生物を対象として、個体群に突然変異を導入し、子孫の中から目的の変異を持つものを選抜する方法が含まれる。これは従来から用いられてきた方法で、必ずしも遺伝子操作によるものではない。

これに対し、遺伝子操作によって特定の遺伝子を破壊する方法を遺伝子ノックアウトという。動物においては、組換えDNAを胚性幹細胞に取り込ませ、ここで元来持っていた遺伝子が操作した遺伝子で置き換わる。この細胞を胚に注入して個体にまで育成する。

ノックアウトに類似の方法で、遺伝子ノックダウンというものがある。これは遺伝子自体を破壊するのでなく、RNA干渉などにより遺伝子の発現を阻止する方法であり、ノックアウトよりはるかに容易に実行できる場合が多い。

ノックイン

詳細は「ノックイン」を参照

ノックアウトと逆に、ある遺伝子の機能を増強する方法である。これには遺伝子コピー数を増やす方法と、発現量を増やす方法がある。

トラッキング（追跡）実験

目的のタンパク質を追跡して、細胞内での局在や相互作用について情報を得る方法である。この方法の一つとしては、野生型遺伝子をGFPなどのレポータータンパク質との融合遺伝子に置き換える方法がある。これにより目的タンパク質がリアルタイムで可視化できる。ただしこうすることで蛋白質の性質が変化してしまうこともあるので注意を要する。さらに改良法として、タンパク質分子に機能には影響を与えないような小さいペプチドタグを付け、抗体で追う方法も試みられている。

出典・脚注

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^ “ヒト受精卵に世界初の遺伝子操作－中国チーム、国際的な物議”. ウォール・ストリート・ジャーナル (2015年4月24日). 2015年11月30日閲覧。
^ “Don’t edit the human germ line”. ネイチャー (2015年3月12日). 2015年11月30日閲覧。
^ Paul Berg and Maxine F. Singer (1995). “The recombinant DNA controversy: Twenty years later” (PDF). Proc. Natl. Acad. Sci. 92: 9011-9013 2015年12月15日閲覧。.
^ Paul Berg, David Baltimore, Sydney Brenner, Richard O. Roblin III, and Maxine F. Singer (1975). “Summary Statement of the Asilomar Conference on Recombinant DNA Molecules” (PDF). Proc. Nat. Acad. Sci. 72 (6): 1981-1984 2015年12月15日閲覧。.
^ 小林哲,竹石涼子 (2015年12月5日). “ゲノム編集、受精卵も容認米英中の科学者団体が声明”. 朝日新聞社. 2015年12月13日閲覧。
^ 川合智之 (2015年12月4日). “生殖目的のゲノム編集「使用禁止を」米英中の科学者団体”. 日経. 2015年12月13日閲覧。
^ 「第七生殖細胞等の遺伝的改変の禁止」“遺伝子治療等臨床研究に関する指針 (PDF)”. 厚生労働省 (2015年8月12日). 2015年12月18日閲覧。
^ 松本邦夫 (2013年). “シンポジウムの序: 生理活性タンパク質・医薬・ベンチャーアカデミア創薬の心・技・体 [(富山大学和漢医薬学総合研究所金沢大学がん進展制御研究所ジョイントセミナー, 第 3 回)] (PDF)”. 2015年12月15日閲覧。
^ 石川雅敏「ジェネンテック社におけるイノベーションのダイナミクス (PDF) 」、『研究技術計画』第22巻3／4、研究・技術計画学会、2007年、 212-219頁、2015年12月15日閲覧。

UpToDate Contents

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1. 血友病の治療 treatment of hemophilia
2. 血小板産生因子の臨床応用 clinical applications of thrombopoietic growth factors
3. 下肢末梢動脈疾患の症状を治療するための試験的治療 investigational therapies for treating symptoms of lower extremity peripheral artery disease
4. Hypertension in athletes
5. 組換え造血成長因子の概要 introduction to recombinant hematopoietic growth factors

Japanese Journal

科学遺伝子組換えで作った青いダリアとコチョウラン

三位正洋
青淵 (794), 20-22, 2015-05
NAID 40020460846

アレルゲン免疫療法のアレルギー性結膜炎への応用 (特集アレルギー性結膜疾患アップデート)

福田憲
アレルギー・免疫 22(5), 692-696, 2015-05
NAID 40020446072

遺伝子組換え作物の栽培状況と表示制度

田代正一
自治研かごしま (109), 48-56, 2015-03
NAID 40020399920

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Japan Pharmaceutical Reference

販売名

ノボラピッド30ミックス注　フレックスペン

組成

インスリンアスパルト（遺伝子組換え）（1筒(3mL)）
（溶解インスリンアスパルト：プロタミン結晶性インスリンアスパルト）

300単位^注1）
（3：7）
　注1）1単位は6nmolに相当。本剤の単位はインスリンアスパルト単位であるが、インスリンアスパルト1単位は、ヒトインスリン（遺伝子組換え）の1国際単位と同等である。

添加物（1筒(3mL)）

酸化亜鉛：58.8μg^注2）
フェノール：4.50mg
m-クレゾール：5.16mg
濃グリセリン：48.0mg
プロタミン硫酸塩：1.0mg
リン酸水素二ナトリウム二水和物：3.75mg
塩化ナトリウム：2.63mg
塩酸：適量
水酸化ナトリウム：適量
　注2）亜鉛含量として

識別（注入ボタン）

色：ロイヤルブルー
刻み：

禁忌

低血糖症状を呈している患者
本剤の成分に対し過敏症の既往歴のある患者

効能または効果

インスリン療法が適応となる糖尿病

糖尿病の診断が確立した患者に対してのみ適用を考慮すること。
糖尿病以外にも耐糖能異常や尿糖陽性を呈する糖尿病類似の病態(腎性糖尿、甲状腺機能異常等)があることに留意すること。

本剤は、超速効型インスリンアナログと中間型インスリンアナログを3：7の割合で含有する混合製剤である。
通常、成人では、初期は1回4〜20単位を1日2回、朝食直前と夕食直前に皮下注射する。なお、1日1回投与のときは朝食直前に皮下注射する。
投与量は症状及び検査所見に応じて適宜増減するが、維持量は通常1日4〜80単位である。

本剤は、ヒト二相性イソフェンインスリン水性懸濁注射液より作用発現が速いため、食直前に投与すること（【薬物動態】の項参照）。
適用にあたっては本剤の作用時間、1mLあたりのインスリンアスパルト含有単位と患者の病状に留意し、その製剤的特徴に適する場合に投与すること。
糖尿病性昏睡、急性感染症、手術等緊急の場合は、本剤のみで処置することは適当でなく、速効型ヒトインスリン製剤を使用すること。

慎重投与

インスリン需要の変動が激しい患者
手術、外傷、感染症等の患者
妊婦（「妊婦・産婦・授乳婦等への投与」の項参照）
次に掲げる低血糖を起こしやすい患者又は状態
重篤な肝又は腎機能障害
下垂体機能不全又は副腎機能不全
下痢、嘔吐、軽症胃アトニー等の胃腸障害
飢餓状態、不規則な食事摂取
激しい筋肉運動
過度のアルコール摂取者
高齢者（「高齢者への投与」の項参照）
血糖降下作用を増強する薬剤との併用（「相互作用」の項参照）
低血糖を起こすと事故につながるおそれがある患者（高所作業、自動車の運転等の作業に従事している患者等）

重大な副作用

低血糖

低血糖（脱力感、倦怠感、高度の空腹感、冷汗、顔面蒼白、動悸、振戦、頭痛、めまい、嘔気、知覚異常、不安、興奮、神経過敏、集中力低下、精神障害、痙攣、意識障害（意識混濁、昏睡）等）があらわれることがある。
なお、徐々に進行する低血糖では、精神障害、意識障害等が主である場合があるので注意すること。また、長期にわたる糖尿病、糖尿病性神経障害、β-遮断剤投与あるいは強化インスリン療法が行われている場合では、低血糖の初期の自覚症状（冷汗、振戦等）が通常と異なる場合や、自覚症状があらわれないまま、低血糖あるいは低血糖性昏睡に陥ることがある。
低血糖症状が認められた場合には通常はショ糖を経口摂取し、α-グルコシダーゼ阻害剤との併用により低血糖症状が認められた場合にはブドウ糖を経口摂取すること。
経口摂取が不可能な場合はブドウ糖を静脈内に投与するか、グルカゴンを筋肉内又は静脈内投与すること。
低血糖は臨床的にいったん回復したと思われる場合にも後で再発することがあるので、経過観察を継続して行うことが必要である。

アナフィラキシーショック、血管神経性浮腫

アナフィラキシーショック（頻度不明）（呼吸困難、血圧低下、頻脈、発汗、全身の発疹等）、血管神経性浮腫（頻度不明）があらわれることがあるので、観察を十分に行い、異常が認められた場合には投与を中止し、適切な処置を行うこと。

薬効薬理

血糖降下作用

正常ブタに皮下投与したとき、速やかに血糖降下作用を発現し、血糖降下作用を持続することが示された^{4) 5)}。

作用機序

インスリンアスパルトは、インスリンB鎖28位のプロリン残基をアスパラギン酸に置換したインスリンアナログであり、二量体形成を阻害する性質を有する。製剤中では亜鉛イオンあるいはフェノール等の作用により弱く結合した六量体を形成しているが、皮下注射後は、体液で希釈されることにより、六量体から急速に二量体、単量体へと解離して速やかに血中に移行し、インスリンレセプターに結合し^{6) 7) 8)}、インスリンで認められる次の作用により短時間で血糖降下作用を発現する。
筋肉・脂肪組織における糖の取込み促進
肝臓における糖新生の抑制
肝臓・筋肉におけるグリコーゲン合成の促進
肝臓における解糖系の促進
脂肪組織における脂肪合成促進
また、プロタミンの添加により、皮下組織におけるインスリンアスパルトの解離が遅延し血中への移行が緩徐となり、血糖降下作用が持続する。

有効成分に関する理化学的知見

一般名

インスリンアスパルト（遺伝子組換え）［命名法：JAN］
insulin aspart（genetical recombination）［命名法：JAN］

分子式

C₂₅₆H₃₈₁N₆₅O₇₉S₆

分子量

5825.54

性状

白色の粉末である。

★リンクテーブル★

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