英: [[]]
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出典(authority):フリー百科事典『ウィキペディア（Wikipedia）』「2014/06/24 20:23:19」(JST)

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クレノウ断片（左）とDNAポリメラーゼI（右）の構造の比較。

クレノウ断片（クレノウだんぺん、Klenow fragment）は、大腸菌のDNAポリメラーゼIをタンパク質分解酵素[[サブチリシン]]で部分分解して得られる断片のうち、大きな方の断片である。DNAポリメラーゼIが持つ3種の活性（DNAポリメラーゼ、5'→3'エキソヌクレアーゼ、3'→5'エキソヌクレアーゼ）のうち、5'→3'エキソヌクレアーゼ活性が失われている。名は1970年にデンマークの生化学者ハンス・クレノウが報告した ^[1] ことにちなんでおり、クレノウフラグメント、クレノウ酵素とも呼ばれる。

使途

DNAポリメラーゼIが持つ5'→3'エキソヌクレアーゼ活性は応用上の障害になる場合が多いが、クレノウ断片はこの活性を欠くことから研究目的で幅広く活用されている。

1本鎖DNAから2本鎖DNAの合成
2本鎖DNAの3'陥没末端のフィルイン(fill-in)
2本鎖DNAの3'突出末端の除去
DNAの放射性標識

歴史

大腸菌からDNAポリメラーゼIを精製する手法は1969年にJovinらが確立していた^[2]が、クレノウがこれを追試したところポリメラーゼ活性を持つ2種類のタンパク質が得られた。1つはJovinのポリメラーゼと同じだと思われたが、もう1つは分子量約7万と小さかった。この小さなタンパク質にもDNAポリメラーゼ活性があったが、5'→3'エキソヌクレアーゼ活性はなかった。そこで大きな方のポリメラーゼをサチライシンで処理したところ、同じく分子量約7万で5'→3'エキソヌクレアーゼ活性のない断片が得られた。^[1]これがクレノウ断片である。

クレノウ断片はポリメラーゼ連鎖反応(PCR)が開発された当初に使われたポリメラーゼでもあったが ^[3]、その後はTaqポリメラーゼなどの耐熱性酵素に取って代わられた。

参考文献

^ ^a ^b Klenow H and Henningsen I (1970). “Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis”. Proc Natl Acad Sci 65: 168–175. doi:10.1073/pnas.65.1.168. PMID 4905667.
^ Jovin, T. M., et al. (1969). “Enzymatic synthesis of deoxyribonucleic acid. XXVI. Physical and chemical studies of a homogeneous deoxyribonucleic acid polymerase.”. J. Biol. Chem. 244 (11): 2996-3008. PMID 4890762.
^ Saiki RK et al. (1985). “Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia”. Science 230: 1350–54. doi:10.1126/science.2999980. PMID 2999980.

外部リンク

Klenow Fragment - the US National Library of Medicine Medical Subject Headings (MeSH)

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2. 免疫グロブリンの構造 structure of immunoglobulins
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段階反応を用いたDNA塩基配列決定方法

★リンクテーブル★

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英: Klenow enzyme
関: クレノウ酵素、Klenow酵素

「Klenow enzyme」

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クレノウ酵素、クレノー酵素、Klenow酵素

「酵素」

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英: enzyme, ferment
関: 酵素反応

酵素の分類

(a)酸化還元酵素(oxydoreductase) EC1:ある物質を酸化したり､還元したりします。脱水素酵素､ペルオキシダーゼなどを含みます。
(b)転移酵素(transferase) EC2: アミノ基やリン酸基などをある物質から別の物質に転移する酵素です。アミノ基を転移する酵素はアミノトランスフェラーゼと呼ばれます。
(c)加水分解酵素(hydrolase) EC3:ある物質(基質)に水(H2OのうちHとOH)を加えることにより､2つに分解します。多くの蛋白分解酵素が含まれます。
(d)リアーゼ(lyase) EC4:ある物質を2つに分解します。
(e)イソメラーゼ(isomerase) EC5:ある基質を異性体に変換します。
(f)リガーゼ(ligase) EC6;ATPのエネルギーを使って2つの物質を結合します。

「クレノウ」

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英: Klenow
関: クレノー

[Klenow-1] Klenow H and Henningsen I (1970). “Selective Elimination of the Exonuclease Activity of the Deoxyribonucleic Acid Polymerase from Escherichia coli B by Limited Proteolysis”. Proc Natl Acad Sci 65: 168–175. doi:10.1073/pnas.65.1.168. PMID 4905667.

[2] Jovin, T. M., et al. (1969). “Enzymatic synthesis of deoxyribonucleic acid. XXVI. Physical and chemical studies of a homogeneous deoxyribonucleic acid polymerase.”. J. Biol. Chem. 244 (11): 2996-3008. PMID 4890762.

[Saiki1-3] Saiki RK et al. (1985). “Enzymatic Amplification of β-globin Genomic Sequences and Restriction Site Analysis for Diagnosis of Sickle Cell Anemia”. Science 230: 1350–54. doi:10.1126/science.2999980. PMID 2999980.

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